本研究作者評(píng)估了生姜衍生納米載體（GDNVs）作為化療藥物阿霉素（Dox）遞送系統(tǒng)的潛力。通過(guò)超聲處理，GDNVs利用靜電作用將Dox包裹在生姜脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)中，負(fù)載效率高達(dá)95.9%±0.26%（在生姜脂質(zhì)濃度為100 μmol/l時(shí)）。透射電子顯微鏡（TEM）顯示，Dox-GDNVs呈近乎球形，粒徑約188 nm，zeta電位為-15.5 mV，與未負(fù)載藥物的GDNVs相似，這些特性有助于延長(zhǎng)血液循環(huán)時(shí)間和增加腫瘤積累概率。Dox-GDNVs在4℃下儲(chǔ)存25d后仍保持穩(wěn)定，且藥物負(fù)載能力不受影響。

此外，作者研究發(fā)現(xiàn)Dox-GDNVs在酸性環(huán)境中能夠快速釋放藥物，尤其在pH值為5.5時(shí)，釋放速度顯著加快。這種pH依賴性釋放特性使其能夠在腫瘤微環(huán)境中高效釋放藥物，減少藥物在正常組織中的分布，從而降低化療副作用，如白細(xì)胞減少、血小板減少和胃腸道毒性。綜上得出，GDNVs能夠高效負(fù)載Dox并實(shí)現(xiàn)pH依賴性釋放，有望成為化療藥物遞送的有效載體。

本研究作者通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)評(píng)估了游離阿霉素（Dox）和Dox-GDNVs（生姜衍生納米載體負(fù)載的阿霉素）對(duì)Colon-26和HT-29結(jié)腸癌細(xì)胞的抗腫瘤活性，主要通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞凋亡來(lái)實(shí)現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞分別接受3.25、6.5和13 μmol/l的游離Dox和Dox-GDNVs處理8h，隨后使用annexin V-FITC/PI試劑盒進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。結(jié)果顯示，游離Dox和Dox-GDNVs均能以濃度依賴性方式降低細(xì)胞存活率，但游離Dox的細(xì)胞毒性更強(qiáng)，表明其通過(guò)被動(dòng)擴(kuò)散快速進(jìn)入細(xì)胞核發(fā)揮抗腫瘤作用。而Dox-GDNVs表現(xiàn)出時(shí)間依賴性釋放特性，延緩藥物釋放，產(chǎn)生持續(xù)細(xì)胞毒性作用。

進(jìn)一步通過(guò)電細(xì)胞底物阻抗傳感（ECIS）技術(shù)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)凋亡，發(fā)現(xiàn)Dox-GDNVs處理的Caco2-BBE細(xì)胞單層電阻呈濃度依賴性下降，而較低濃度的游離Dox即可顯著降低電阻。此外，通過(guò)檢測(cè)凋亡標(biāo)志物裂解的半胱天冬酶-3/7，證實(shí)了Dox-GDNVs誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。實(shí)驗(yàn)表明，Dox-GDNVs在體外具有良好的抗腫瘤活性，且通過(guò)納米載體遞送可實(shí)現(xiàn)藥物的緩釋和持續(xù)作用。

本研究通過(guò)非侵入性成像技術(shù)評(píng)估了阿霉素-葉酸修飾的生姜衍生納米載體（Dox-FA-GDNVs）的體內(nèi)腫瘤靶向能力和抗腫瘤效果。實(shí)驗(yàn)中，DiR標(biāo)記的GDNVs和FA-GDNVs被靜脈注射到小鼠體內(nèi)，結(jié)果顯示DiR熒光在多個(gè)器官中均有分布，其中肝臟熒光強(qiáng)度最高。FA-GDNVs在腫瘤中的熒光強(qiáng)度比普通GDNVs高約2.8倍，表明其具有主動(dòng)靶向腫瘤的能力。此外，F(xiàn)A-GDNVs在小鼠體內(nèi)循環(huán)48h后仍保持穩(wěn)定，為藥物在腫瘤部位的積累提供了更長(zhǎng)時(shí)間窗口。

在抗腫瘤實(shí)驗(yàn)中，攜帶Colon-26腫瘤的小鼠被分為四組（生理鹽水、游離阿霉素、FA-GDNVs和Dox-FA-GDNVs）進(jìn)行治療。結(jié)果顯示，Dox-FA-GDNVs顯著抑制了腫瘤生長(zhǎng)，效果優(yōu)于游離阿霉素。組織學(xué)分析也證實(shí)，Dox-FA-GDNVs處理的腫瘤切片中癌細(xì)胞數(shù)量顯著減少。這些結(jié)果表明，葉酸修飾的GDNVs能夠增強(qiáng)阿霉素的抗腫瘤效果，同時(shí)減少藥物對(duì)正常組織的毒性。

Dox-FA-GDNVs對(duì)植入的Colon-26細(xì)胞的抗腫瘤效果還通過(guò)免疫組化檢測(cè)細(xì)胞增殖標(biāo)志物Ki67和TUNEL實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了評(píng)估。結(jié)果顯示，與接受游離阿霉素治療的小鼠腫瘤相比，接受Dox-FA-GDNVs治療的小鼠腫瘤中Ki67陽(yáng)性細(xì)胞的比例顯著降低。在游離阿霉素治療的小鼠腫瘤中，Ki67陽(yáng)性細(xì)胞的平均比例為64.67%，而接Dox-FA-GDNVs治療的腫瘤中，相應(yīng)比例僅為10%。

TUNEL實(shí)驗(yàn)表明，在接受生理鹽水或FA-GDNVs治療的小鼠腫瘤中，TUNEL陽(yáng)性（綠色）凋亡細(xì)胞幾乎無(wú)法檢測(cè)到（分別為4.7%和3.3%）。而在接受游離阿霉素治療的小鼠腫瘤中，凋亡細(xì)胞可以被檢測(cè)到（占18%），并且在Dox-FA-GDNVs治療的小鼠腫瘤中更為顯著，凋亡細(xì)胞占所有癌細(xì)胞的43.3%。這些結(jié)果證實(shí)，Dox-FA-GDNVs比游離阿霉素具有更強(qiáng)的抗腫瘤效果。

作者通過(guò)H&E染色（蘇木精-伊紅染色）結(jié)果顯示，與生理鹽水處理的對(duì)照組相比，各治療組（包括游離阿霉素和Dox-FA-GDNVs）在心臟、肝臟、脾臟、肺和腎臟中均未顯示出明顯的組織或細(xì)胞損傷跡象。具體而言，未觀察到心肌纖維化、心組織空泡化、肝細(xì)胞水腫、脾臟粒細(xì)胞增多、腎臟腎小管空泡化和腎小管擴(kuò)張伴出血區(qū)域，以及肺組織肺泡壁增厚和細(xì)胞浸潤(rùn)等病理變化。這些發(fā)現(xiàn)表明，葉酸修飾的GDNVs（FA-GDNVs）作為一種藥物遞送平臺(tái)，具有減少游離藥物毒性和不良反應(yīng)的潛力。

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